HPLC分析のコツ（５） サンプルループのお話

今回はサンプルループの話です。

｢実際のループの容量には、規格の値の±10%の誤差があります。｣
具体的には、｢20μL と表示してある サンプルループの容量は、18～22μLのバラツキがあります。メスフラスコのように一定容積になっていませんから、注意してください。」ということです。

例えば、検量線を作るのに20μLのループを使ったところで、5、10、20μLの試料を注入したとすると、20μLのところで、予想よりも値が小さくなることがあります。理由は明らかですよね。このように、シリンジ注入で使う場合は、ループの容量の50％を最大注入量の目安にすると良いでしょう。
ループ注入というのは、極めて再現性の良い注入方法ですが、注入絶対量は正しくありません。また、 同じ試料でも、装置毎にピークの面積や高さは異なります。これも、サンプルループ 容量の個体差に基づくものなのです。

では、なぜこのような誤差が生じるのか。これは、ループの作り方に原因があります。

(内径×1/2)²×3.14×長さ

サンプルループ（200μL）

で、ループの内容量が決まります。あとは、決められた長さで配管を切って、 サンプルループに仕上げていきます。 問題は、ステンレス配管の内径の精度です。これは、内径に関係なく、0.03mm(1/1000インチ)ですので、0.5mm配管では±10％、0.76mm配管では±7％、0.3mm配管では17％の誤差が生じます。

ループ容量と内径の関係は、20～100μL(0.5mm)、200～1000μL,2000～5000μL(1.0mm)となります。